我司与医院合作文章
英文名：MitochondrialComplexICoreProteinRegulatescAMPSignalingviaPhosphodiesterasePde2andNADHomeostasisinCandidaalbicans
中文名：白色念珠菌线粒体复合体Ⅰ核心蛋白通过磷酸二酯酶Pde2和NAD稳态调节cAMP通路信号
发表期刊：FrontiresinMicrobiology
影响因子IF=4.
技术手段：cAMP、NADH、NAD定量检测
作者资料
合作单位：中国医医院皮肤病研究所
刘维达，中国医医院皮肤病研究所，研究员。在国内外发表论文70多篇。擅长各种真菌性感染，包括各种癣病、甲病、真菌性肉芽肿等。也擅长其他常见皮肤病的诊疗。
研究背景
念珠菌是美国第四大最常见血流感染（BSI）的致病因。由于其抗药性和没有合适的诊断方式，念珠菌病仍然是一种高死亡率疾病。开发能够对抗真菌，甚至是识别念珠菌特异性靶点的抗真菌药物，是治疗念珠病的有效方式。白色念珠菌和酵母的基因组对比揭示了一系列的信号通路。其中，cAMP/PKA途径主要通过协调能量消耗与生理条件下的细胞活动（例如麦角固醇的生物合成）来调节营养代谢。本研究采用HPLC-MS/MS平台研究CⅠ突变体中cAMP/PKA介导的麦角固醇合成机制。
研究方法
(1)CⅠ突变体为组1，CⅢ与CⅣ突变体为组2。
(2)使用HPLC（Agilent-）在nm处检测麦角固醇。
(3)使用HPLC-MS/MS测定cAMP、NADH和NAD的含量。
HPLC-MS/MS系统由WatersUPLC和SCIEXABMS组成。MS电喷雾以正模式进行，质量范围为-和8-Da。流动相A：水（乙酸铵）；流动相B：乙腈（乙酸铵）。每次分析时间为12分钟。
(4)通过RT-PCR测量RAS1，RAS2，PDE1和PDE2的表达。
(5)cAMP、PDE（cPDE）活性测定。
.
研究结果
图1、白念珠菌cAMP/PKA营养代谢信号通路和两个下游调节因子
HPLC-MS/MS的结果表明cAMP/PKA介导麦角固醇反应在所有的突变中的表现均不相同。研究发现在ndh51Δ突变体（CI核心亚基）与goa1Δ突变体（CI调节因子）中麦角固醇的水平分别降低了47.3%和23.5%。相比其他突变体，ndh51Δ与goa1Δ突变体的cAMP显著减少且海藻糖显著积累。
图2、野生型与ETC复合体突变体麦角固醇和cAMP的含量
图3、线粒体应激下cAMP含量减少与海藻糖的积累
CIII突变体中，尽管cAMP水平正常，麦角固醇的含量也相应的减少30%，表现出了独特的麦角固醇响应。
虽然，ndh51Δ和goa1Δ两个CI突变体具有特异的cAMP/PKA介导麦角固醇的合成。但结果还表明cAMP降低的程度与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）的减少线性相关，这在7种CI突变体均有表现。
图4、NAD与cAMP的含量降低线性相关
结论
线粒体CI复合体与线粒体中NADH和cAMP/PKA信号通路相互作用，可以调节白色念珠菌中麦角固醇的合成和海藻糖的积累。线粒体CI保守的亚基Ndh51p对维持高NAD电势和最佳的cAMP浓度有着重要作用。该研究的结果可以帮助人们去探索通过麦角固醇抑制剂与cAMP拮抗剂协同作用共同开发真菌感染的治疗方案。
-THEEND-
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